生物(wù)學(xué)基礎三項？審核員關注哪些？

在申請510(K)時，最常碰到的生物(wù)學(xué)測試主要為(wèi)三項，細胞毒性，刺激和緻敏，也就是我們經常說的生物(wù)學(xué)基礎三項。

我們來聊一聊FDA審核員在審核細胞毒性測試報告時主要在看測試報告中(zhōng)什麽内容。

細胞毒性依據的标準是ISO 10993-5，一般我們建議實驗室出具(jù)符合GLP的報告，審核員在拿(ná)到報告後會在報告中(zhōng)重點關注下列内容:

(一般用(yòng)于510(k)申請的報告都為(wèi)英文(wén)，所以為(wèi)了能(néng)讓大家在英文(wén)報告中(zhōng)找到對應内容，這裏我們使用(yòng)英文(wén)相關術語，避免歧義):

1.細胞毒性測試的類型。主要的實驗類型有(yǒu)兩種：

包括Direct Contact Method, Extraction Method (MEM Elution)。或者其它方法。

FDA當前推薦适用(yòng)MEM方法，也就是上述的Extraction Method (MEM Elution). 如果實驗使用(yòng)了其它方法，那麽FDA需要提供使用(yòng)其它方法的合理(lǐ)性解釋；

2.實驗樣品信息，報告中(zhōng)需要包含用(yòng)于此次實驗樣品的信息，比如部件名(míng)稱，材料名(míng)稱等；

3.Extraction Conditions

a. Extraction Vehicle

浸提介質(zhì)一般包括Culture medium with 5-10% serum, Culture medium without serum, Physiological saline solution,或者其它。

FDA當前推薦使用(yòng)Culture medium with 5-10% serum。如果使用(yòng)其它浸提介質(zhì)，需要給出合理(lǐ)的解釋。

b.Extraction Conditions

浸提條件一般包括37℃ for 24 hr, 37℃ for 72 hr, 50℃ for 72 hr, 70℃ for 24 hr, 121℃ for 1 hr, 或者其它浸提條件。

FDA當前推薦使用(yòng)37℃ for 24 hr, 或者37℃ for 72 hr。如果使用(yòng)其它條件，則需要給出合理(lǐ)的解釋。

FDA主要擔心過高的浸提溫度可(kě)能(néng)會造成細胞培養基中(zhōng)蛋白質(zhì)完整性的喪失，進而影響測試結果的有(yǒu)效性。

至于37℃ for 24 hr 和37℃ for 72 hr的條件具(jù)體(tǐ)選擇24小(xiǎo)時還是72小(xiǎo)時呢(ne)，我們可(kě)以基于器械預期用(yòng)途來判定，如果器械使用(yòng)持續時間小(xiǎo)于或等于24小(xiǎo)時，則選擇37℃ for 24 hr的浸提條件，否則則建議選擇37℃ for 72 hr。

c.Was the test extract diluted, filtered, or was the pH adjusted?

FDA當前建議在報告中(zhōng)明确包含浸提液狀态的描述，此描述應可(kě)以清洗的說明浸提液是否在使用(yòng)前經過稀釋，過濾或者調節pH值。

FDA期待的描述中(zhōng)，應該清楚的表明，浸提液在使用(yòng)前沒有(yǒu)經過上述處理(lǐ)。

d.Study Controls

研究對照設計，一般包括Positive Control only, negative control only, vehicle control only, 或者上述兩種對照。

FDA當前推薦使用(yòng)Positive Control, negative control, vehicle control全部三種對照。如果不是，那麽需要給出合理(lǐ)的解釋。

e.Extract/Test Article is clear

FDA當前建議在報告中(zhōng)包含對浸提物(wù)質(zhì)的狀态進行描述，浸提介質(zhì)中(zhōng)的測試樣本是否清晰，比如不渾濁，沒有(yǒu)顆粒，沒有(yǒu)顔色改變，沒有(yǒu)膨脹或者降解.

FDA期待的描述中(zhōng)應該如上述所列，沒有(yǒu)這些情況出現。

f.Extract Storage Conditions

浸提溶劑的存儲條件包括兩種Used by 24 hrs post-extraction, 和Stored (>24 hrs)。也就是浸提後的溶劑是否在24小(xiǎo)時内使用(yòng)。

FDA當前建議浸提後的溶劑需要在24小(xiǎo)時内使用(yòng)，否則需要給出合理(lǐ)的解釋，并提供使用(yòng)存儲了24小(xiǎo)時後的浸提溶劑進行實驗對結果沒有(yǒu)影響的證據。

一般建議浸提後立即使用(yòng)。

4.Methods

a. Test System

FDA當前推薦的實驗細胞毒性的實驗系統為(wèi)L-929 Mouse Fibroblasts (monolayer), 如果不是此實驗系統，則需要提供替代細胞類型的描述，并給出合理(lǐ)的解釋。

b. Assessment Times After Treatment

FDA當前推薦的評價時間為(wèi)37℃ for 48 hr minimum, 如果使用(yòng)的不是推薦時間，則需要給出具(jù)體(tǐ)的所使用(yòng)的評價時間，并給出合理(lǐ)的解釋為(wèi)什麽可(kě)以接受此時間。

對于植入物(wù)，72小(xiǎo)時是合适的。

c. Was the following scale used for test extract, reagent control, negative control and positive control?

0: discrete intracytoplasmic granules & no lysis

1: occasional lysed cells (0-20% cells rounded, loose)

2: no extensive cell lysis (20-50% cells rounded)

3: 50-70% lysis (50-70% cells rounded)

4: nearly complete destruction of cell layer (>70% lysis)

FDA當前推薦使用(yòng)上述評分(fēn)系統對樣品浸提物(wù)以及對照品進行打分(fēn)評價。如果使用(yòng)的不是此方法，則需要給出所使用(yòng)評價方法合理(lǐ)性的解釋。

注意，此處0代表noncytotoxic, 1或2代表測試樣品需要根據制造材料來确定是否可(kě)以接受，3或4代表cytotoxic，也就是有(yǒu)毒。

d. Were there deviations?

FDA當前建議報告中(zhōng)明确結果是否存在偏差，如果存在，則需要提供解釋，為(wèi)什麽此偏差不會影響結果的有(yǒu)效性。

5.Results

a. Were there any cell abnormalities?

FDA當前建議報告中(zhōng)明确描述是否存在任何形式的細胞異常。如果存在，需要描述此異常。

b. Were cytotoxicity scores in the controls as expected?

FDA當前建議報告中(zhōng)明确描述對照組的細胞評分(fēn)是否符合預期，如果不符合預期，則需要提供解釋為(wèi)什麽不符合預期的對照組評分(fēn)不會影響測試結果的有(yǒu)效性。

6.Conclusion

Cytotoxic Potential

FDA當前建議報告中(zhōng)明确關于潛在毒性的測試結論，實驗結論一般包括non-cytotoxic (Grade 0), non-cytotoxic (Grade 1 or 2), Cytotoxic (Grade 3 or 4).

如果是後兩項結論，則需要給出為(wèi)什麽此結論不會影響産(chǎn)品的安(ān)全性。

如果提交的細胞毒性測試報告，包含了上述6條涉及的内容，并且也符合FDA對此項内容的預期，則FDA審核員會很(hěn)快的結束細胞毒性的審核；如果報告包含了上述6條涉及的内容，但是其内容不符合FDA的預期，則FDA審核員會花(huā)更多(duō)時間來審核給出的解釋，或要求提供解釋。

總之，在提交前，甚至測試前，充分(fēn)和實驗室溝通，确保報告包含這些要素，并且取得符合FDA預期的結果，則細胞毒性的審核将會以最快的速度完成。

後續，我們會根據我們的審核經驗，針對510(k)提交中(zhōng)各個審核要點，陸續制作(zuò)一些列的内容，希望可(kě)以減少大家在510(k)審核過程中(zhōng)花(huā)費的事件，并盡可(kě)能(néng)的避免一些不必要的問題。